Evaluación in vitro de inhibidores de cruzipaína (CZP) derivados del núcleo1,2,3-triazol como potenciales agentes contra la infección por Trypanosoma cruzi

Abstract

Cruzipaína (CZP) es una enzima perteneciente a la familia multigénica de cisteín-proteasas presentes en Trypanosoma cruzi, para la cual se han descrito diversas funciones esenciales talescomo la participación en la diferenciación metaciclogénica de T. cruzi, en la invasión celular y como factor de virulencia y modulador de la respuesta de los macrófagos ante la infección. Dado el rol imprescindible de CZP para el ciclo de vida del parásito, esta enzima constituye un blanco erapéutico con gran potencial para el desarrollo de inhibidores de naturaleza peptidomimética anto reversibles como irreversibles. En un trabajo previo se han empleado técnicas de diseño de fármacos basado en estructuras para realizar un screening de candidatos a inhibidores de CZP que contienen el grupo 1,2,3-triazol 1,4-disustituido, fundamentado en una estrategia de reemplazo bioisostérico no clásico del enlace peptídico. En el presente trabajo se reportan los resultados obtenidos para la evaluación de actividad biológica de los 32 candidatos sintetizados más prometedores. Dicha evaluación se llevó a cabo empleando modelos de infección in vitro utilizando células Vero como células hospedadoras y tripomastigotes de la cepaTulahuen que expresan la proteína β-galactosidasa. La determinación de los niveles de infección relativos en base a la actividad del gen reportero demostró que ~25% de los inhibidores diseñados y sintetizados poseen actividad contra la infección celular, disminuyendo en al menos un 50% la infección total a una concentración de 10 μM sin afectar significativamente la viabilidad de la célula hospedadora. De los resultados obtenidos, se diseñó una librería enfocada en el inhibidor irreversible más prometedor, orientado a la obtención de nuevas entidades químicas, refinando las relaciones cuantitativas estructura-actividad involucradas en una subcavidad particular del sitio catalítico de CZP.