Estudio del gen TcZonda, un posible regulador de autofagia en Trypanosoma cruzi

Abstract

La autofagia es un proceso evolutivo conservado por el cual las células eucariotas degradan sus componentes citoplasmáticos para obtener energía. Si bien se cree que este proceso ha surgido principalmente como una respuesta al estrés nutricional en los organismos unicelulares, en organismos multicelulares la autofagia ha sido también relacionada con numerosas enfermedades. Se conoce muy poco acerca de la autofagia en protistas y menos aún de su implicancia biológica.En Trypanosoma cruzi, se observó que los niveles de autofagia aumentan ante el estrés nutricional y que se produce un aumento de la autofagia durante la diferenciación de epimastigotes a tripomastigotes. De este modo, dado que los cambios repentinos en su entorno y el proceso de diferenciación en T. cruzi son esenciales para la sobrevida del parásito, la vía autofágica puede ser un target prometedor para la búsqueda de nuevos blancos terapéuticos para la Enfermedad de Chagas.Recientemente se ha caracterizado una inmunofilina en Drosophila melanogaster, denominada Zonda (Zda), la cual es críticamente necesaria para la autofagia inducida por estrés nutricional. Con el objetivo de identificar nuevos componentes en la vía autofágica de T. cruzi, realizamos búsquedas bioinformáticas en la base de datos TriTrypDB, identificando dos candidatos con alta identidad a Zda, que difieren en su longitud en pares de base pero que comparten sus dominios funcionales. En primer lugar verificamos el transcripto correcto mediante RT-PCR a partir de RNA de epimastigotes, tripomastigotes y amastigotes de T. cruzi, corroborando además su expresión en los tres estadios del parásito. Posteriormente el gen correspondiente denominado TcZonda fue amplificado por PCR y subclonado en el vector inducible pTcIndex y en el vector pRibotex. Ambas construcciones se utilizaron para transfectar epimastigotes de T. cruzi. Estos estudios permitirán profundizar el conocimiento de una vía importante para la sobrevida del parásito.