Diseño de estrategias para la determinación de benzodiacepinas empleando quenching de fluorescencia

Abstract

Los contaminantes emergentes son sustancias químicas que llegan al medioambiente a consecuencia de diferentes actividades humanas y que persisten allí generando alteraciones en el metabolismo de los seres vivos y en la salud humana en particular. De todos los contaminantes emergentes, los que probablemente suscitan mayor preocupación y estudio en los últimos años son los fármacos (metabolitos secundarios, disruptores endocrinos y drogas de abuso). Dentro de este grupo se encuentran las benzodiacepinas (BDZ), que son fármacos que permiten aumentar la actividad de diferentes neurotransmisores, reduciendo así el funcionamiento de ciertas áreas del cerebro, razón por la cual producen somnolencia, descenso de la ansiedad y relajación muscular1,2.En el presente trabajo se propone una nueva estrategia para la determinación indirecta de tres BDZs (alprazolam (ALP), clonazepam (CNZ) y diazepam (DZP)) mediante la atenuación que generan en la señal fluorescente (efecto quenching) de la molécula de seroalbúmina bovina (BSA).Se estudiaron diferentes parámetros experimentales que influyen en el efecto de quenching de las BDZs sobre la BSA (λex = 280 nm, λem = 340 nm, slits: 5/5). Esto es: pH, concentración de BDZs/BSA, concentración y naturaleza de buffer, presencia de exaltadores de la señal (tensoactivos de diversa naturaleza). El efecto de quenching (estático) sobre la emisión fluorescente de BSA fue descripto por la ecuación de Stern-Volmer3,4 siendo los valores de las constantes obtenidas bajo las condiciones óptimas (KSV) de 3,77 × 103 L mol-1 (DZP); 9,07 × 103 L mol-1 (ALP) y 1,78 × 104 L mol-1 (CNZ) a temperatura ambiente. Se evidenció una tolerancia adecuada con un límite de detección de 3,2 × 10-6 mol L-1. Las curvas de calibrado presentan una buena linealidad en las condiciones ensayadas.Las estrategias diseñadas serán incluidas dentro de un esquema automatizado combinando una técnica separativa como HPLC a fluorescencia molecular. Este esquema permitirá la determinación simultánea de diferentes BDZs como potenciales contaminantes emergentes en muestras ambientales con adecuada sensibilidad, minimizando el consumo de reactivos y el tiempo de muestreo.