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dc.contributor.author Repetto, S. A.
dc.contributor.author Alba Soto, Catalina Dirney
dc.contributor.author Cazorla, Silvia Ines
dc.contributor.author Tayeldin, Maria Lia
dc.contributor.author Cuello Pagnone, Marina Soledad
dc.contributor.author Lasala, M. B.
dc.contributor.author Tekiel, Valeria Sonia
dc.contributor.author González Cappa, S. M.
dc.date.available 2017-10-11T20:35:25Z
dc.date.issued 2013-02
dc.identifier.citation Repetto, S. A.; Alba Soto, Catalina Dirney; Cazorla, Silvia Ines; Tayeldin, Maria Lia; Cuello Pagnone, Marina Soledad; et al.; An improved DNA isolation technique for PCR detection of Strongyloides stercoralis in stool samples; Elsevier; Acta Tropica; 126; 2; 2-2013; 110-114
dc.identifier.issn 0001-706X
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/11336/26458
dc.description.abstract Strongyloides stercoralis is a nematode that causes severe infections in immunocompromised patients. The low parasitic burden of chronically infected patients makes diagnosis difficult to achieve by conventional methods. Here, an in-house (IH) method for the isolation of parasite DNA from stools and a PCR assay for the molecular diagnosis of S. stercoralis were optimized. DNA yield and purity improved with the IH method which included a step of incubation of stool samples with a glycine–SDS buffer and mechanical disruption prior to DNA extraction. For the PCR assay, the addition of bovine serum albumin was required to neutralize inhibitors present in stool. The analytical sensitivity of the PCR using DNA as template, isolated with the IH method, was superior to the commercial one. This study demonstrates that a combined method that adds the step of glycine–SDS buffer incubation plus mechanical disruption prior to DNA isolation with the commercial kit increased PCR sensitivity to levels of the IH method. Finally, our assay was tested on 17 clinical samples. With the IH method for DNA isolation, a S. stercoralis specific band was detected by PCR in the first stool sample in all patients (17/17), while with the commercial kit, our S. stercoralis-specific band was only observed in 7 samples. The superior efficiency of the IH and combined methods over the commercial kit was demonstrated when applied to clinical samples with low parasitic burden. These results show that the DNA extraction procedure is a key to increase sensitivity of the S. stercoralis PCR assay in stool samples. The method developed here could help to improve the molecular diagnosis of S. stercoralis.
dc.format application/pdf
dc.language.iso eng
dc.publisher Elsevier
dc.rights info:eu-repo/semantics/restrictedAccess
dc.rights.uri https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.subject Strongyloides stercoralis
dc.subject Nematode DNA isolation
dc.subject Molecular diagnosis
dc.subject Stool sample DNA isolation
dc.subject.classification Ética Médica
dc.subject.classification Ciencias de la Salud
dc.subject.classification CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA SALUD
dc.title An improved DNA isolation technique for PCR detection of Strongyloides stercoralis in stool samples
dc.type info:eu-repo/semantics/article
dc.type info:ar-repo/semantics/artículo
dc.type info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.date.updated 2015-05-28T21:41:48Z
dc.journal.volume 126
dc.journal.number 2
dc.journal.pagination 110-114
dc.journal.pais Países Bajos
dc.journal.ciudad Ámsterdam
dc.description.fil Fil: Repetto, S. A.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; Argentina
dc.description.fil Fil: Alba Soto, Catalina Dirney. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; Argentina
dc.description.fil Fil: Cazorla, Silvia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; Argentina
dc.description.fil Fil: Tayeldin, Maria Lia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; Argentina
dc.description.fil Fil: Cuello Pagnone, Marina Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; Argentina
dc.description.fil Fil: Lasala, M. B.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina
dc.description.fil Fil: Tekiel, Valeria Sonia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentina
dc.description.fil Fil: González Cappa, S. M.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; Argentina
dc.journal.title Acta Tropica
dc.relation.alternativeid info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0001706X13000272
dc.relation.alternativeid info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/http://dx.doi.org/10.1016/j.actatropica.2013.02.003


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